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產品描述

本產品為iCell團隊精心優化的間充質干細胞成脂誘導分化試劑盒，可增強間充質干細胞向成脂細胞分化的能力。

本產品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。

產品組成成分及保存

注意：

1.為保證產品的有效性，請避免反復凍融。

2.配制好的誘導培養基保存于2-8℃，有效期為2周，請根據實驗用量合理配制。

產品使用說明

1. 成脂誘導分化完全培養基的配制

①室溫條件下融化各因子及血清。各因子融化后，瞬時離心，使溶液集中于離心管底部。（注意：若因子或血清中有沉淀物，屬正?，F象，無須過濾，避免成分丟失。）

②根據實驗用量，于無菌操作臺中配制誘導分化完全培養基，建議每次配制50mL，配制比例見下表：

2. 成脂誘導分化實驗步驟

①建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的間充質干細胞，將其消化下來，離心收集，使用含10%FBS的完全培養基調整細胞密度，均勻鋪于培養瓶/板中，置于37℃5%CO2，飽和濕度的培養箱中培養。（細胞接種詳情參考表二）

表二 

②待細胞匯合度達80%~100%時，即可進行誘導分化。

③小心吸棄細胞培養上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養基，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。（注意：完全培養基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）

④每2~3day換用新鮮的誘導分化完全培養基。換液時，若細胞培養上清顏色變為澄清的黃色，是由于細胞量較大，培養基消耗較快導致的，請及時縮短換液周期。（注意：完全培養基加入前需提前置于37℃預熱。）

⑤細胞誘導3周后，即可進行油紅O染色鑒定。

3. 油紅染色分析

①細胞誘導分化結束后，小心吸棄細胞培養上清，1×PBS潤洗1~2次。加入適量細胞固定液，室溫固定30 min。（細胞固定液為4%中性甲醛溶液等，體積參考表二）

②配制油紅O工作液：油紅O貯存液與蒸餾水按照3：2配制，（例：油紅O貯存液3mL，蒸餾水2mL），混勻。使用濾紙過濾，收集濾液，即為油紅O工作液。（注意：成脂細胞內的油滴極易脫落，操作時須謹慎。）

③細胞固定完成后，吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入適量油紅O工作液，室溫染色30min。（注意：油紅O工作液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若細胞染色后有沉淀，PBS洗去即可。）

④吸出染色液，PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果。細胞內油滴著色，呈紅色。（注意：油紅O工作液不可重復使用，不建議回收。）

成脂細胞油紅染色（圖片僅供參考）

左圖：100倍；右圖：200倍

質量控制

ü 無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）

ü pH測試

ü 滲透壓檢測

ü 內毒素

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