細胞詳述
臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中,子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。
由于臍帶是分娩過程中的廢棄物,同時從臍帶中分離人臍靜脈內(nèi)皮細胞方法相對成熟,使得人臍靜脈內(nèi)皮細胞作為工具細胞,在醫(yī)學和生物學研究領域中獲得廣泛應用。
該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。(轉(zhuǎn)染后此細胞帶有嘌呤霉素抗性)。穩(wěn)定表達GFP蛋白。
注意事項: 收到細胞后第一次傳代建議1:2傳代,充液培養(yǎng)基可以用來培養(yǎng)細胞。
細胞篩選
該細胞為已經(jīng)構(gòu)建好穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。
初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。
細胞特性
1) 細胞來源于人臍帶組織。
2) 細胞鑒定:血小板-內(nèi)皮細胞粘附分子(PECAM-1/CD31)或血管假性血友病因子(vWF)免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5) 細胞生長方式:上皮樣細胞,貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用人臍靜脈內(nèi)皮原代細胞+GFP細胞專用培養(yǎng)基(iCell-0050a-001b)作為體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮原代細胞+GFP細胞的培養(yǎng)基。
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
產(chǎn)品使用
1) 本產(chǎn)品僅能用于科研
2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核
3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核
1.收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
5.客戶在細胞培養(yǎng)過程中,有任何技術問題可以撥打技術售后服務電話:021-34512991,我們隨時給予解答。
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