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細胞介紹

該細胞系來自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤。這些細胞表達神經生長因子(NGF)受體。細胞鋪在經四型膠原酶包被的培養瓶上，可逆地響應NGF 誘導產生神經表型。這些細胞不合成腎上腺素。

細胞特性

1） 來源：大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤

2） 形態：成團狀懸浮、半貼壁；小的形狀不規則細胞

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。

一．培養基及培養凍存條件準備

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養基；優質胎牛血清，5%；熱滅活馬血清，10%；雙抗，1%。

注意事項：

1. PC12未分化細胞呈簇狀生長，伴有少量松散貼壁的細胞，細胞密度低時細胞呈懸浮聚團和半貼壁狀態，細胞高密度時為全懸浮聚團狀態。換液、傳代時可保留漂浮生長的細胞。為保持細胞未分化狀態需加馬血清進行培養。

2. 該細胞傳代時不需要胰酶消化，用移液管吹打細胞至脫落后，即可分瓶傳代。吹打后如仍有少量貼壁的細胞，可以采用細胞刮收集細胞或丟棄處理。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理

1）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。

該細胞輕微貼壁和懸浮培養的細胞，傳代可以參考以下方法

1. 收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 該細胞傳代時不需要胰酶消化，用移液管吹打細胞至脫落后，即可分瓶傳代。吹打后如仍有少量貼壁的細胞，可以采用細胞刮收集細胞或丟棄處理。

3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和收集下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×10V7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。