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細(xì)胞介紹

?Expi293F細(xì)胞是Expi293表達(dá)系統(tǒng)的核心組分，來(lái)源于人胚腎細(xì)胞293[HEK-293]細(xì)胞系，是293F細(xì)胞的一個(gè)亞克隆。Expi293F細(xì)胞保持懸浮培養(yǎng)，在Expi293表達(dá)培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)直至達(dá)到高密度。? 相比適應(yīng)Expi293表達(dá)培養(yǎng)基的其他293細(xì)胞，Expi293F細(xì)胞表現(xiàn)出生長(zhǎng)更快且存活率更高的生長(zhǎng)特性，同時(shí)Expi293F細(xì)胞具有高度可轉(zhuǎn)染性，并且在瞬時(shí)蛋白表達(dá)中產(chǎn)生較高產(chǎn)量的外源蛋白質(zhì)得率?。?可廣泛適用于高產(chǎn)量表達(dá)的蛋白生產(chǎn)、重組抗體表達(dá)?、四環(huán)素誘導(dǎo)細(xì)胞?蛋白表達(dá)、工業(yè)化生物反應(yīng)器等應(yīng)用方向。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：人 女 胎兒，胚腎 

2） 形態(tài)：上皮樣細(xì)胞，懸浮生長(zhǎng)

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：只提供1.8mL凍存管包裝發(fā)貨，二保一，

5)  用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸：1.8mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。

細(xì)胞接收后的處理

 收到凍存細(xì)胞后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1) 人胚腎細(xì)胞Expi293F細(xì)胞培養(yǎng)用無(wú)血清專(zhuān)用培養(yǎng)液（推薦貨號(hào)：iCell-h273-001b）不需要另外添加血清等其他成分。為我公司研發(fā)改良產(chǎn)品，該款完全培養(yǎng)液不含血清、水解物及任何動(dòng)物來(lái)源的成分，適合于不同亞型Expi293F細(xì)胞的高密度懸浮培養(yǎng)，可實(shí)現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達(dá)。培養(yǎng)基不含P/S雙抗，可根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)情況添加1% P/S進(jìn)行培養(yǎng)。

Expi293F細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，傳代培養(yǎng)需在二氧化碳培養(yǎng)箱中用水平孵育搖床搖晃培養(yǎng)瓶（125mL搖瓶）水平震蕩培養(yǎng)，搖床速度為100-120 RPM。細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，注意及時(shí)換液傳代。復(fù)蘇后每隔24小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，建議細(xì)胞濃度在2-3×10^6/ml時(shí)進(jìn)行傳代，傳代后濃度推薦為10^6/ml，凍存密度推薦為1-2×10^7/管。該細(xì)胞我公司只提供凍存管包裝發(fā)貨，發(fā)二管保其中一管。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。培養(yǎng)參考：傳代比例1: 2-1：3，傳代周期2-3天。

3）凍存液：RPM1640培養(yǎng)液82%+10%FBS+DMSO 8% 現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1.8mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含20 mL完全培養(yǎng)基的125mL搖瓶（或三角培養(yǎng)瓶）中在帶有水平孵育搖床功能的二氧化碳培養(yǎng)箱中水平震蕩培養(yǎng)，搖床速度為100-115 RPM過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：該細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，注意及時(shí)換液傳代。

該細(xì)胞生長(zhǎng)快速，復(fù)蘇后每隔24小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，建議細(xì)胞濃度在2-3×10^6/ml時(shí)進(jìn)行傳代，傳代后濃度推薦為10^6/ml，傳代時(shí)采取半換液法，傳代比例為1：2-1：3，傳代后補(bǔ)充對(duì)應(yīng)完全培養(yǎng)基到20mL左右，繼續(xù)將125mL搖瓶在帶有水平孵育搖床功能的二氧化碳培養(yǎng)箱中水平震蕩培養(yǎng)。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

1. 凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集好的細(xì)胞懸液到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。細(xì)胞的凍存密度推薦為1-2×10^7/管。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1-2×10^7個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。