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細胞介紹

?Expi293F細胞是Expi293表達系統的核心組分，來源于人胚腎細胞293[HEK-293]細胞系，是293F細胞的一個亞克隆。Expi293F細胞保持懸浮培養，在Expi293表達培養基中可生長直至達到高密度。? 相比適應Expi293表達培養基的其他293細胞，Expi293F細胞表現出生長更快且存活率更高的生長特性，同時Expi293F細胞具有高度可轉染性，并且在瞬時蛋白表達中產生較高產量的外源蛋白質得率?。?可廣泛適用于高產量表達的蛋白生產、重組抗體表達?、四環素誘導細胞?蛋白表達、工業化生物反應器等應用方向。

細胞特性

1） 來源：人 女 胎兒，胚腎 

2） 形態：上皮樣細胞，懸浮生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：只提供1.8mL凍存管包裝發貨，二保一，

5)  用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸：1.8mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇。

細胞接收后的處理

 收到凍存細胞后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

一．培養基及培養凍存條件準備

1) 人胚腎細胞Expi293F細胞培養用無血清專用培養液（推薦貨號：iCell-h273-001b）不需要另外添加血清等其他成分。為我公司研發改良產品，該款完全培養液不含血清、水解物及任何動物來源的成分，適合于不同亞型Expi293F細胞的高密度懸浮培養，可實現重組蛋白和抗體的高水平表達。培養基不含P/S雙抗，可根據細胞培養情況添加1% P/S進行培養。

Expi293F細胞懸浮生長，傳代培養需在二氧化碳培養箱中用水平孵育搖床搖晃培養瓶（125mL搖瓶）水平震蕩培養，搖床速度為100-120 RPM。細胞生長速度快，注意及時換液傳代。復蘇后每隔24小時對細胞進行計數，建議細胞濃度在2-3×10^6/ml時進行傳代，傳代后濃度推薦為10^6/ml，凍存密度推薦為1-2×10^7/管。該細胞我公司只提供凍存管包裝發貨，發二管保其中一管。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。培養參考：傳代比例1: 2-1：3，傳代周期2-3天。

3）凍存液：RPM1640培養液82%+10%FBS+DMSO 8% 現用現配。

二．細胞處理

1） 凍存細胞的復蘇

將含有1.8mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含20 mL完全培養基的125mL搖瓶（或三角培養瓶）中在帶有水平孵育搖床功能的二氧化碳培養箱中水平震蕩培養，搖床速度為100-115 RPM過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：該細胞生長速度快，注意及時換液傳代。

該細胞生長快速，復蘇后每隔24小時對細胞進行計數，建議細胞濃度在2-3×10^6/ml時進行傳代，傳代后濃度推薦為10^6/ml，傳代時采取半換液法，傳代比例為1：2-1：3，傳代后補充對應完全培養基到20mL左右，繼續將125mL搖瓶在帶有水平孵育搖床功能的二氧化碳培養箱中水平震蕩培養。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

1. 凍存時按照細胞傳代的過程收集好的細胞懸液到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。細胞的凍存密度推薦為1-2×10^7/管。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1-2×10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。