儲存條件：2-8°C
應(yīng)用：定量檢測小鼠血清、血漿、細胞液、體液以及組織勻漿中IL 4的含量
（本指標(biāo)為反向競爭法試劑盒，詳細實驗原理以英文為準(zhǔn)，可在產(chǎn)品相關(guān)文檔處下載詳細說明書）
用途：本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！
名稱 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 保存 | |
1 | 預(yù)包被平底微孔板 | 96孔 | 1可拆卸板 | 2-8℃密封冷藏 |
2 | 酶結(jié)合物(HRP) | 6毫升 | 1瓶 | 2-8℃冷藏 |
3 | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 1毫升 | 6瓶 | 2-8℃冷藏 |
4 | 顯色劑A | 6毫升 | 1瓶 | 2-8℃冷藏 |
5 | 顯色劑B | 6毫升 | 1瓶 | 2-8℃避光冷藏 |
6 | 終止液 | 6毫升 | 1瓶 | 2-8℃冷藏 |
7 | 濃縮洗滌液 (100倍濃縮) | 10毫升 | 1瓶 | 2-8℃冷藏 |
8 | 平衡液 | 3毫升 | 1瓶 | 2-8℃冷藏 |
9 | 使用說明書 | 1份 |
一． 試劑盒組成
注意：平衡液僅僅適用于標(biāo)本是細胞液、體液以及組織勻漿樣品的檢測時所使用
二．樣本處理及保存
1. 血清
采集血清時不加抗凝劑，采集后室溫靜置1-2小時，1000 × g (或3000 rpm)離心15分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>
2. 血漿
采集血漿，要加入總體積1%的抗凝劑 (EDTA，肝素等)，采集后先室溫或4℃靜置半小時后，1000 × g (或3000 rpm)離心15分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>
3. 組織裂解液
組織裂解的方式取決于組織的類型，一般來講，先用預(yù)冷的PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 清洗組織后稱重。一般0.5g組織加入500ul預(yù)冷的PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2)，在冰上的玻璃容器內(nèi)研碎。用超聲或者反復(fù)凍融的方法裂解細胞膜，1500×g (或5000 rpm) 離心15分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>
4. 細胞裂解液
1) 懸浮細胞直接離心取細胞沉淀。貼壁細胞需用胰酶消化后離心取細胞沉淀。檢測某些指標(biāo)時不能用胰酶消化。
2) 用PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 洗3遍。
3) 用少量PBS重懸細胞，超聲或者反復(fù)凍融的方法裂解細胞膜，1500×g (或5000 rpm) 離心15分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>
5. 細胞上清及體液
1000 × g (或3000 rpm)離心15分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>
三．試劑準(zhǔn)備
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。
2. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用。
四．操作步驟（實驗前必須仔細看實驗準(zhǔn)備）
1. 取出試劑盒，于室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入100 μL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入100 μL的樣品，空白對照加入100 μL的蒸餾水。
4. 加10 μL的平衡液于已加樣品的孔中（不含空白對照孔），如果標(biāo)本是血清或者血漿，此步驟忽略。
5. 在各孔中加入50 μL的酶標(biāo)記溶液（不含空白對照孔）。
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時（在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度）。
7. 充分清洗酶標(biāo)板5次，保持各孔有充足的水壓（濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋）。
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙徹底拍干。
9. 各孔加入顯色劑A 50 μL。
10. 各孔加入顯色劑B 50 μL。
11. 37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘。
12. 各孔加入50 μL終止液，終止反應(yīng)。
13. 將微孔板至于450nm波長的酶標(biāo)儀下進行讀值（吸光度值即為OD值）。
五．實驗注意事項
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免第一孔與最后一孔之間的時間間隔過大，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間，從而影響實驗的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器。
3. 孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進行孵育，嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。
4. 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響最后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5. 反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，10分鐘左右），如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
6. 建議實驗前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進行稀釋，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
7. 建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個標(biāo)本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系，如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
1. 樣本收集完畢后，要分裝保存在-20°C (少于3個月) 或-80°C (少于6個月)以保持蛋白活性和避免污染。避免反復(fù)凍融 如果要在24小時內(nèi)分析樣本，可以保存在2- 8°C。
2. 凍存的樣本應(yīng)該緩慢的恢復(fù)到室溫，然后慢慢地混勻，不能加熱來融化樣本。
3. 某些化學(xué)裂解液會對某些指標(biāo)的檢測會有干擾，比如SDS，Triton。謹慎使用。
4. 樣本液中含有沉淀物會對ELISA有干擾，務(wù)必離心去除。
5. 不要使用高脂血或溶血的樣本，對ELISA有干擾，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。
6. 其他樣本的準(zhǔn)備方法，請聯(lián)系技術(shù)部售后服務(wù)人員。
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