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儲存條件：2-8°C

應用：定量檢測小鼠血清、血漿、細胞液、體液以及組織勻漿中IFNγ的含量

（本指標為反向競爭法試劑盒，詳細實驗原理以英文為準，產品相關文檔處可下載詳細說明書）

用途：本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一． 試劑盒組成

注意：平衡液僅僅適用于標本是細胞液、體液以及組織勻漿樣品的檢測時所使用

二．樣本處理及保存：

1. 血清

采集血清時不加抗凝劑，采集后室溫靜置1-2小時，1000 × g (或3000 rpm)離心15分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。

2. 血漿

采集血漿，要加入總體積1%的抗凝劑 (EDTA，肝素等)，采集后先室溫或4℃靜置半小時后，1000 × g (或3000 rpm)離心15分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。

3. 組織裂解液

組織裂解的方式取決于組織的類型，一般來講，先用預冷的PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 清洗組織后稱重。一般0.5g組織加入500ul預冷的PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2)，在冰上的玻璃容器內研碎。用超聲或者反復凍融的方法裂解細胞膜，1500×g (或5000 rpm) 離心15分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。

4. 細胞裂解液

1) 懸浮細胞直接離心取細胞沉淀。貼壁細胞需用胰酶消化后離心取細胞沉淀。檢測某些指標時不能用胰酶消化。

2) 用PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 洗3遍。

3) 用少量PBS重懸細胞，超聲或者反復凍融的方法裂解細胞膜，1500×g (或5000 rpm) 離心15分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。

5. 細胞上清及體液

1000 × g (或3000 rpm)離心15分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。

三．試劑準備

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。

2. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用。

四．操作步驟（實驗前必須仔細看實驗準備）

1. 取出試劑盒，于室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入100 μL的標準品溶液于空白微孔中。

3. 空白微孔中加入100 μL的樣品，空白對照加入100 μL的蒸餾水。

4. 加10 μL的平衡液于已加樣品的孔中（不含空白對照孔），如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略。

5. 在各孔中加入50 μL的酶標記溶液（不含空白對照孔）。

6. 將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應 1小時（在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度）。

7. 充分清洗酶標板5次，保持各孔有充足的水壓（濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋）。

8. 酶標板洗滌后用吸水紙徹底拍干。

9. 各孔加入顯色劑A 50 μL。

10. 各孔加入顯色劑B 50 μL。

11. 37℃下避光反應10-15分鐘。

12. 各孔加入50 μL終止液，終止反應。

13. 將微孔板至于450nm波長的酶標儀下進行讀值（吸光度值即為OD值）。

五．實驗注意事項

1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免第一孔與最后一孔之間的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性；一般加樣時間控制在10分鐘內，如果樣本數量過多，可使用多道移液器。

3. 孵育：樣品要在密閉的容器內進行孵育，嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。

4. 洗滌：洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響最后的酶標儀讀數。

5. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，10分鐘左右），如果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。

6. 建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。

7. 建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商聯系，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失。